知識中心

News
推薦產品 / Products
發布時間: 2017 - 07 - 18
Drop Maker 樣本制備儀采用光、機、電一體化設計,配套具有自主知識產權的微流控芯片,可以將水相樣本快速制備成納升體積的液滴。液滴數與樣本體積相關,30微升樣本可制備約5萬個液滴。液滴尺寸均一,并可在PCR擴增后保持穩定。產品說明起始樣本量(μL)20-50制備通量1-8個樣本制備時間4min / 8樣本每 30 μL 樣本液滴數約50000個儀器尺寸(寬 ´ 深 ´ 高)38 x 34 x 35 cm
發布時間: 2017 - 07 - 18
Chip Reader 生物芯片分析儀采用光、機、電一體化設計,及激光共聚焦原理,配套有自主知識產權的微流控芯片,可以準確快速地定位、識別納升體積微液滴,獲取其熒光信號值。經過泊松統計分析,提供研究者所需的陽性、陰性液滴數絕對數值,從而推算出起始靶標核酸分子的精確濃度。Chip Reader  生物芯片分析儀兼容Taqman水解探針和EVAGreen檢測。產品說明閱讀通道FAM(EvaGreen)、VIC(HEX)閱讀通量1-8個樣本閱讀時間20min / 8樣本儀器尺寸(寬 ´ 深 ´ 高)45 x 47 x 49 cm
發布時間: 2020 - 03 - 13
該試劑盒采用創新的RNA一步法逆轉錄數字PCR技術,可對樣本中的2019-nCoV進行高靈敏與準確定量檢測。參考國家CDC和WHO的指南,針對2019-nCoV的多個區域進行檢測,增加檢測的特異性并減少漏檢錯檢。試劑盒內設有內參基因,可對采樣、提取和PCR擴增等步驟進行質控,確保檢測過程的精準可靠。該試劑盒目前已經在多家新型冠狀病毒治療重點醫院或國家重點實驗室開展臨床評價,目前的評估數據顯示有非常優異的性能。
聯系我們
電話: 0755-2955 6666
郵箱: [email protected]
地址: 中國深圳寶安中心區寶 源路F518時尚創意園15棟3層

數字PCR在DNA甲基化檢測中的應用

日期: 2020-03-27
瀏覽次數: 43

數字PCR在DNA甲基化檢測中的應用


DNA甲基化是目前研究最多的表觀遺傳修飾之一,發生于CpG二核苷酸序列C5位置的胞嘧啶上,多發生于CpG島上,研究發現,DNA甲基化參與調節多種細胞過程,包括胚胎發育,轉錄,X染色體失活,基因組印跡、染色體穩定性等。


許多研究發現,DNA甲基化在一系列的疾?。ㄈ绨┌Y等)起到十分重要的作用。在癌癥患者中,與正常人體相比,DNA甲基化多發生兩個變化:1、啟動子區域CpG島的高甲基化,導致腫瘤抑制基因沉默;2:重復區域的低甲基化,導致基因組不穩定1,2。

數字PCR技術在DNA甲基化檢測中的應用

圖1:DNA甲基化與癌癥的關系1


DNA甲基化的改變多發生于癌癥早期,在某些特定癌癥中,檢測特異的甲基化標志物有助于癌癥的早期發現,進而大大提高癌癥患者的生存率。目前,美國國家癌癥協會(ACS)在最近更新的結直腸癌篩查指南中建議每3年做一次多靶點糞便DNA的甲基化檢測。因此,急需找到一個靈敏度高、特異性強、操作簡單快捷的方法對臨床樣本DNA甲基化進行檢測。


微液滴數字PCR?(ddPCR)是近年來PCR技術的一項新進展,通過微液滴化,終點PCR和泊松分布,數字PCR無需標準曲線即可實現核酸濃度的絕對定量。與實時定量PCR技術(qPCR)對比,數字PCR具有靈敏度高,準確度高、精密度高、重復性高,對PCR抑制劑耐受度高的優勢。


目前,Dawne N等人3使用數字PCR進行DNA甲基化的檢測。結果顯示,數字PCR方法可檢出低至0.5%的SNRPN啟動子甲基化,其線性R2可達到0.9903,且兩次完全獨立的實驗重復性極強。

數字PCR技術在DNA甲基化檢測中的應用

數字PCR技術在DNA甲基化檢測中的應用

圖2:ddPCR檢測DNA甲基化的靈敏度、線性范圍3


數字PCR技術在DNA甲基化檢測中的應用

數字PCR技術在DNA甲基化檢測中的應用

圖3:ddPCR檢測DNA甲基化的穩定性

(A、B為兩次完全獨立實驗)3


使用ddPCR方法檢測VIM基因啟動子DNA甲基化,其最低靈敏度可達到0.03%,線性R2可達到0.9998。且將ddPCR結果與NGS檢測結果對比,一致性強,所用DNA量更少。


Liesbeth Van Wesenbeeck等人4使用ddPCR和qPCR做DNA甲基化線性檢測時,圖4對比結果顯示,在檢測低拷貝DNA時,ddPCR準確性較qPCR更高。

數字PCR技術在DNA甲基化檢測中的應用

圖4:ddPCR(左圖)與qPCR(右圖)測試高拷貝

(1157拷貝/反應,上圖)與低拷貝(222拷貝/反應,下圖)

DNA甲基化實測值與理論值之差與理論值關系圖4


綜上所述,使用ddPCR方法進行DNA甲基化分析時,其靈敏度高,穩定性高,準確性高,可用于檢測血漿游離DNA、FFPE DNA等多種樣本來源的DNA的甲基化狀態。因此,基于ddPCR的甲基化檢測技術將來有潛力應用于腫瘤甲基化標志物的檢測中,輔助臨床診斷和治療,應用于腫瘤早診和篩查領域。


新羿生物專注于微液滴數字PCR全鏈條自主研發,包括芯片、儀器、試劑、軟件等核心產品,目前已申請專利50余項,開發產品數十項。新羿生物的試劑類產品不僅可以在新羿TD-1數字PCR平臺上使用,而且可以在其他商用微液滴數字PCR平臺上使用,靈敏度高,特異性好,重復性高。新羿生物的微液滴數字PCR技術在檢測過程中全程封閉檢測,不需轉移液滴,可避免交叉污染,方便、準確、靈敏。


隨著人民生活水平的提高,我國結直腸癌(Colorectal Carcinoma, CRC)發病率逐年升高,現在我國發達地區CRC已經是發病率居第二位的惡性腫瘤,成為威脅我國人民健康的一種重大疾病,但是CRC發展相對緩慢,可以通過早期發現而得到根治及預防。新羿結直腸癌甲基化基因檢測試劑盒采用Methyl-ddPCR技術,以CRC糞便樣本DNA為檢測對象,對CRC糞便樣本中多個基因的甲基化狀態同時進行檢測,從而輔助臨床早期診斷結直腸癌。



參考文獻:

1、Keith D. Robertson,?“DNA methylation and human disease”.?Nature Reviews: Genetics.?2005; 6: 597-610.

2、Ernst J. Kuipers,?et al.?“Colorectal cancer”.?Nature Reviews:?Disease Primers.?2015; 1: 1-25.

3、Dawne Shelton,?et al.?“AACR 2014 - Cross Validation of NGS methylated targets using ddPCR”. https://www.researchgate.net/publication/263043581.

4、Liesbeth Van Wesenbeeck,?et al.?“Droplt digital PCR is an accurate method to assess methylation status on FFPE samples”.?Epigenetics.?2018;?13 (3): 207–213.




上一篇:無下一篇:無
相關新聞 / Related News More
聯系我們
地址:北京市海淀區成府路268號中科科儀大廈5號樓305室
電話:010-82481061
 
Copyright ?2017 - 2024 北京新羿生物科技有限公司
犀牛云提供企業云服務
体彩排列5走势图综合版